tRNA的作用是将特定的氨基酸带到mRNA和核糖体复合体的特定位置，用来合成特定氨基酸序列的蛋白质。每种tRNA都有俩个作用部位：一个是与氨基酸连接的部位；另一个是反密码子部位，可以与mRNA上的密码子互补配对。在遗传密码表中共64种密码子，在64种密码子中，有61个是氨基酸密码子，剩余3种终止密码子。因为每种tRNA上的反密码子只能跟mRNA上的1种氨基酸密码子配对，所以tRNA有61种。
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